聚合酶鏈鎖反應(yīng)，Polymerase chain reaction，簡(jiǎn)稱PCR，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于擴(kuò)增特定的DNA片段，這種方法可在生物體外進(jìn)行，不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項(xiàng)技術(shù)，被廣泛地運(yùn)用在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)室，例如用于判斷檢體中是否會(huì)表現(xiàn) 某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制，以及親子鑒定。
PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局
PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為4個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域，由擴(kuò)增前區(qū)到擴(kuò)增后區(qū)，且要嚴(yán)格分開(kāi)。實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄筆、紙、清潔材料等，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑制備區(qū)–樣品制備區(qū)—擴(kuò)增區(qū)—擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流動(dòng)到擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間，工作間與緩沖間之間宜安裝聯(lián)鎖裝置。不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室，并有明顯的標(biāo)志，各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連，需安裝物品 傳遞窗。每個(gè)工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈，紫外燈的波長(zhǎng)為254nm。
實(shí)驗(yàn)室較為理想的布局模式為有一個(gè)專用走廊，試劑制備區(qū)，樣品制備區(qū)，擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很規(guī)范的排列在一起。內(nèi)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)為正壓或常壓狀態(tài)，緩沖間內(nèi)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)，使這三個(gè)區(qū)的空氣流向由實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)向外，緩沖間內(nèi)通向內(nèi)實(shí)驗(yàn)室和走廊的門可安一種聯(lián)鎖裝置，當(dāng)一個(gè)門打開(kāi)時(shí)，另一門必須關(guān)閉狀態(tài)，防止出現(xiàn)兩個(gè)門同時(shí)打開(kāi)的情況。
?PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的功能及主要設(shè)備
1.試劑制備區(qū)主要是擴(kuò)增試劑的配制，分裝盒保存。主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機(jī)、加樣器、紫外燈。
2.樣品制備區(qū)主要是樣品的混樣和測(cè)試樣品的制備。主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、紫外燈。根據(jù)制備樣品的性質(zhì)和要求決定操作臺(tái)是用生物安全柜、凈化工作臺(tái)、還是排毒柜，如疾控中心、臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一般選用生物安全柜，植物轉(zhuǎn)基因、檢疫等可選排毒柜。
3.擴(kuò)增區(qū)是pcr擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和模板的加入，核酸擴(kuò)增。加樣應(yīng)在生物安全柜（超凈工作臺(tái)）內(nèi)進(jìn)行，超凈工作臺(tái)的氣流方向宜選擇垂直式。核酸擴(kuò)增設(shè)備為冰箱、生物安全柜、離心機(jī)加樣器、廢棄物容器、紫外燈。
4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。若實(shí)驗(yàn)僅采用全自動(dòng)擴(kuò)增檢測(cè)儀，可將 區(qū)與擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并為一個(gè)區(qū)。本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱等。
?PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)室之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為了避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送排的氣流組織形式。
實(shí)驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角宜采用弧形線條過(guò)濾；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議使用PVC卷材地面或自流平地面，整體性好，便于進(jìn)行清掃，耐腐蝕。
